撰文：小明月

来源：干细胞者说

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近百年来，重组胰岛素合成及给药方式的进步从根本上降低了糖尿病相关疾病的发病率和死亡率。尽管如此，全世界仍有4亿病人因糖尿病并发症遭受致命影响，如糖尿病肾病、眼病和神经系统疾病。严格的饮食控制，可减缓或预防2型糖尿病并发症的发展，但这种严格的饮食控制也会引起低脂血症，所以这种方法也受病人状况限制。通过实体胰腺器官移植或胰岛移植的方法实现替代β细胞功能，可达到不使用外源胰岛素控制血糖目的。但由于胰岛来源有限，因此，用干细胞生产出充足的分泌胰岛素的细胞资源，可满足β细胞替换，达到胰岛素非依赖的广泛需求。干细胞技术的发展、组织工程的进步再加上生物材料的发展，使得其离临床转化越来越近，成为最有潜力的糖尿病替代治疗策略。然而，干细胞治疗糖尿病关键技术和核心问题仍有待深入研究和克服。

一、如何生成功能完整的胰岛

近10余年，用人源干细胞衍生的功能性β细胞取得了显著进展。基本策略是重演了胚胎时期多能干细胞分化的主要路径：形成明确的内胚层、胰腺内胚层，再到内分泌前体（祖）细胞，并最终形成胰岛细胞。

机体内β胰岛细胞并非独立存在。事实上，β细胞功能的维持高度依赖于胰岛复杂的细胞结构，而分离态的胰岛细胞与完整结构中的胰岛细胞行为不同。比如，由于基础胰岛素分泌量和葡萄糖刺激下**胰岛素分泌量下降，分离态的β细胞跟完整结构状态中的细胞相比，其葡萄糖刺激下的胰岛素分泌功能低下。加之其它机制，像细胞-细胞信号交流的协调、细胞间隙连接蛋白Connexin-36等均在维持胰岛素水平波动中与β细胞联结和胰岛同步过程发挥重要作用。

考虑要生产最理想效果的治疗糖尿病的人胚胎干细胞，所以制备细胞时必须考虑如何重建胰岛细胞与细胞的接触和胰岛与微环境的交流结构。β细胞一个主导性功能是与胰岛小生境中其它细胞的信息交流，包括多种非内分泌型细胞，如内皮细胞、周细胞、神经细胞和间充质细胞。胰腺中胰岛的血管高度发达，每个β细胞都与内皮细胞产生一个或多个接触，并在接触处形成特殊的超微结构。

在胰腺发育过程中，最初是内皮细胞被内分泌细胞分泌的VEGF-A招募到迅速生长的胰岛，然后内皮细胞合成和分泌胰岛膜基质，并作为β细胞生长、存活和功能的关键调节因子。胰岛血管小生境不仅包括内皮细胞，还包括周细胞。周细胞包裹在内皮细胞管周围，以提供结构支持和产生成熟功能的血管并调节内皮细胞的增殖、存活和功能。周细胞在正常胰岛功能中的作用还不完全清楚，而遗传敲除研究则表明，成年鼠胰岛中周细胞的缺失会导致胰岛素表达和葡萄糖清除障碍。

胰岛细胞结构对内分泌功能很重要，各种方法被用于体外产生工程胰岛，或所谓的‘假胰岛’。多项研究报告表明，无论是在体外还是在体内，移植了假胰岛的再聚体之后，功能都得到了改善。也有证据表明，与仅由β细胞组成的假胰岛相比，β细胞与内皮祖细胞重新聚集在一起后，GSIS（葡萄糖刺激的胰岛素分泌）得到了改善。

总之，确定最适合人体胰岛功能的细胞组成和结构布局。种子细胞的来源有限。一种选择是从胚胎干细胞（hESCs）或诱导多能干细胞（iPSCs）中产生胰岛β细胞。另一个挑战是，目前创建人工胰岛的技术依赖于内分泌细胞和非内分泌细胞之间的胰岛类器官。也许有一天，胰岛组织的3D打印或许成为可能，从而能够完成所希望的结构。

二、胰岛细胞治疗中的免疫问题

使用β细胞替代治疗1型糖尿病的成功，再加上hESCs或iPSCs衍生β细胞的生产，为有效治疗该疾病提供了思路。然而，免疫排斥问题是细胞替代疗法治疗糖尿病的主要障碍。目前免疫抑制剂虽然有效，但需终生使用。

同种免疫排斥

在1型糖尿病患者中，异基因β细胞面临同种免疫介导的排斥反应，如果不被抑制，可在几天内清除移植细胞。T细胞是主要因素，激活由T细胞受体（TCR）识别MHC结合的抗原肽。MHC蛋白的HLA是异基因免疫攻击的主要靶点，女性受体中出现的男性抗原或线粒体抗原，也能引起排斥反应，尽管速度较慢。

免疫抑制可避免异基因β细胞遭受排斥，但移植了患者的免疫系统，容易遭受感染和恶性肿瘤的侵袭。一种理想的策略是训练免疫系统接受移植的细胞，避免慢性全身免疫抑制。许多临床前动物模型已经实现了对移植组织的免疫耐受，目前，正在为人类治疗开发潜在的耐受性方法。

在过去20年，人们一直努力研究诱导移植耐受性策略。策略之一：构建供者-受体造血嵌合体。供体免疫细胞的存在，将培养受体免疫细胞接受供体来源的细胞作为自身细胞，从而防止移植排斥。但是混合嵌合状态不稳定，导致宿主或供体免疫系统失衡而被一方主导并接管。当供体细胞占优势时，移植物抗宿主病的风险就很高；当受体细胞占上风时，对供体的耐受性往往会丧失。另一种策略是：用过继细胞疗法促进Treg细胞功能。但也有问题，大量可对供体反应的效应T细胞可压倒Treg细胞介导的抑制，用Treg细胞控制排斥反应，需要减少受体体内针对供体产生反应的T细胞。

自身免疫问题

在1型糖尿病患者中，胰岛自身抗原特异性T细胞也可攻击和破坏移植的β细胞，从而促使移植的β细胞被排斥。有趣的是，通常的实体器官免疫抑制剂并不能有效诱导糖尿病缓解。大多数常用于预防同种免疫介导的移植排斥免疫抑制药物，有助于短期糖尿病缓解，但无长期疗效。在免疫抑制的胰腺和肾移植受者中，传统药物用于抑制自身免疫反应，也观察到攻击胰岛细胞的自身免疫复发。T细胞和B细胞靶向治疗，如抗CD3，可使一些新的1型糖尿病患者的β细胞功能暂时停止下降。抗胸腺细胞球蛋白是一种在器官移植中常用于诱导T细胞衰竭的药物，在高剂量时不能防止β细胞丢失，低剂量与G-CSF联合使用时具有短期效益。

除了免疫调节策略外，也可开发胰岛抗原特异性治疗策略。临床前数据表明，用胰岛抗原制备的肽疫苗或纳米微粒可靶向于特定效应细胞来诱导免疫耐受，但在患者中的有效性仍有待临床试验证明。抗原特异性免疫治疗面临的挑战是免疫系统所针对的胰岛抗原的数量；仅解除针对一种或一群胰岛抗原特异性T细胞的杀伤功能，不足以改变疾病进程。此外，在不同患者、不同疾病阶段，胰岛抗原的特异性可能不同，因此很难知道哪些特异胰岛抗原才是目标。诱导主要抗原特异免疫调控的方法可能更有效，更容易应用于不同患者群体。

Treg细胞治疗有吸引力的特点，主要在于关乎效应T细胞对主要抗原特异性反应的调节。例如，Treg细胞通过 “关联抑制” 和 “传染性耐受” 来控制不希望的免疫反应。在关联抑制中，一个抗原激活的Treg细胞可抑制在同一组织微环境中出现的针对其它抗原的反应。

在免疫耐受中，Treg细胞创造了一个耐受性组织微环境，从而使附近其它激活的T细胞也发挥调节作用，这使得Treg细胞的抑制性能够随着时间推移而传播，而不仅仅局限于起始细胞的存在。这些特性确保了特异性有限的Treg细胞能够对局部其它免疫细胞进行特异、显著和持久的控制。动物实验证明单次注射胰岛抗原特异性Treg细胞可诱导自身免疫性非肥胖糖尿病小鼠糖尿病终生缓解。目前，Treg细胞细胞治疗1型糖尿病患者的临床试验正在进行中，显示了其可行性和安全性。

三、干细胞治疗糖尿病的策略

干细胞移植是治疗糖尿病最有前景的方法之一，多能干细胞衍生胰岛β细胞有望解决胰岛供体不足的问题。但从干细胞研究到临床应用还需要经历一个漫长的发展过程。临床上，胰岛移植技术越来越成熟，对移植位置和血供等的研究使得胰岛移植成为治疗的金标准，患者健康状况也需考虑，以保证临床治疗得到满意临床疗效。

由于干细胞生产的β细胞越来越成熟，临床应用越来越可靠，然而，免疫排斥问题仍不容小觑。虽然可以用基因编辑方法剔除免疫相关基因来降低免疫排斥或提升免疫耐受，但由于细胞复杂，细胞间存在相互关联和制约关系，容易造成免疫系统失衡，在临床应用时仍需要深入、谨慎考量和抉择。采用组织工程方法把胰岛素分泌细胞包裹到特殊材料的微型胶囊装置里，一方面可提供胰岛素分泌细胞，另一方面可限制免疫细胞攻击。在实际操作中也面临了诸多复杂问题，尤其是技术问题，但仍有临床试验产品推出，因此前景依然看好。

干细胞封装化已进入临床试验阶段。2014年，第一例基于ESC治疗1型糖尿病的产品已进入临床试验（NCT02239354），命名为VC‑01（ViaCyt公司），这是hESC衍生的胰腺内胚层细胞（称为PEC‑01细胞），是一种皮下注射植入半渗透式药装置，可免疫隔离，允许氧气和营养物质通过，这一临床试验评估了糖尿病治疗候选药物PEC-Encap 的安全性、耐受性及疗效。另一个临床试验（NCT01652911）并不能进行免疫隔离，将其植入皮肤下血管处30天后，随后再植入胰岛细胞。这项为期3年的临床试验在招募了3个患者之后最终终止。

四、小结

总之，干细胞为糖尿病患者治疗提供了新的可期待治疗途径。尽管这些领域仍有不小技术障碍，但新的胶囊技术、新的免疫调节方法、干细胞分化方法的改进和基因编辑手段的结合应用，新技术将给糖尿病患者带来了革命性的现代细胞治疗方法。（来源：网络）